技術文章
Technical articles一、流動相的pH應在使用範圍內(nei)
以矽膠為(wei) 基質的反相色譜柱的pH範圍為(wei) 2~9,流動相超過其pH範圍將會(hui) 導致矽膠基質流失和鍵合相碳鏈斷裂,使柱效下降,壽命變短。
二、去除樣品和流動相匯總的固體(ti) 顆粒
樣品和流動相中含有固體(ti) 顆粒物質會(hui) 堵塞色譜柱篩板,不僅(jin) 會(hui) 引起柱壓的升高,而且也會(hui) 引起柱效下降。因此,建議使用超純水和色譜純試劑,在分析前對樣品進行針筒過濾,流動相過0.45um濾膜。
三、使用保護柱或在線過濾器
保護柱和在線過濾器上都有篩板,其孔徑與(yu) 色譜柱篩板孔徑相同,因此可以阻止固體(ti) 顆粒物質到達色譜柱,有效防止色譜柱篩板的堵塞。由於(yu) 柱壓升高在分析故障中占很大比例,因此除對樣品和流動相進行過濾外,建議您在色譜柱進樣端加上保護柱或在線過濾器。
四、正確使用緩衝(chong) 鹽
緩衝(chong) 鹽使用不當會(hui) 使其在流動相(含有機溶劑)中析出,堵塞填料基質上的微孔和顆粒間的空隙,使填料板結,柱壓上升;同時阻礙了基質上的鍵合的碳鏈自由舒展,使用色譜柱的保留能力下降,柱效降低。
建議使用前要過濾,使用後要衝(chong) 洗。具體(ti) 方法如下:
1、等度條件:使用緩衝(chong) 鹽前和使用後需要過濾流動相1.0ml/min流速衝(chong) 洗60min.
2、梯度條件:用含有緩衝(chong) 鹽的流動相跑梯度之前,用與(yu) 初始流動相組成相同的過濾流動相似1.0ml/min流速衝(chong) 洗60min;分析完成後,再用該過濾流動以1.0ml/min衝(chong) 洗色譜柱120min。含緩衝(chong) 鹽流動相的梯度設定應盡量平緩,以避免梯度過程中緩衝(chong) 鹽析出。
五、柱清洗方法:
1、未使用緩衝(chong) 鹽:每天分析完成後,用純甲醇或純乙腈反向衝(chong) 洗色譜柱60min。
2、使用過緩衝(chong) 鹽:分析完成後,先後用上述方法除去緩衝(chong) 鹽,然後再用純甲醇或乙腈反向衝(chong) 洗色譜柱60min。