我公司推出氣相色譜-串聯質譜法測定血液中乙基葡萄糖醛酸苷

氣相色譜-串聯質譜法測定血液中乙基葡萄糖醛酸苷

目的 ：建立血液中乙基葡萄糖醛酸苷（ethyl glucuronide，EtG）的氣相色譜-串聯質譜（GC-MS/MS）測定方法。

方法 血液用於(yu) 乙腈沉澱蛋白，離心後，將上清液轉移吹幹，殘留物經N,O-雙（*基矽烷基）三氟乙酰胺衍生化，用GC-MS/MS進行檢測。結果 血液中EtG的檢出限為(wei) 0.05ul/ml，線性範圍為(wei) 0.1-10ul/ml（r=0.9999）。對送檢案例血液檢材進行EtG檢測，效果良好。

結論 本方法適用於(yu) 血液中EtG的檢測。

關(guan) 鍵詞：法醫毒理學；血液；乙基葡萄糖醛酸苷；氣相色譜儀(yi) -串聯質譜法

酒後駕車是一個(ge) 世界性的交通安全問題。我國每年因交通事故死亡中約25%-30%與(yu) 酒後駕車有關(guan) 。由於(yu) 乙醇在體(ti) 內(nei) 代謝較快，一般飲酒後6-8h體(ti) 內(nei) 已檢測不到乙醇。對於(yu) 疑酒後駕車肇事後逃逸者，在一定時間後體(ti) 內(nei) 檢測不到乙醇，因此需要尋找新的途徑證明肇事者是否為(wei) 酒後駕車。

乙醇進入人體(ti) 後，有一部分乙醇與(yu) 尿嘧啶核苷-5‵-二磷-葡萄糖醛酸結合成乙基葡萄糖醛酸苷（ethyl glucuronide，EtG）由於(yu) 其比原體(ti) 乙醇的半衰期長，當血液中乙醇濃度低於(yu) 檢測*，體(ti) 內(nei) 仍可在一定時間內(nei) 檢出EtG。因此血液中EtG的檢測及評價(jia) 越來越為(wei) 人們(men) 所重視 ，特別是酒後駕車肇事逃逸案件中，抽血與(yu) 事故發生時間隔過長，血液中往往測不出乙醇成分，但可以檢測血液中EtG^。

血液中EtG的測定方法主要有液相色譜-串聯質譜法（LC-MS/MS）和氣相色譜-質譜聯用發（GC-MS）。LC-MS/MS是zui常用的檢測方法。GC-MS測定中雜質幹擾較多，對樣品前處理要求較高，需要固相萃取，樣品處理時間長，而氣相色譜-串聯質譜法（GC-MS/MS）可以克服這些缺點。

本研究建立了血液用乙腈沉澱蛋白，經衍生化後用GC-MS/MS檢測EtG的方法

1 材料與(yu) 方法：

   1.1 儀(yi) 器與(yu) 試劑

           氣相色譜（美國Agilent公司）與(yu) 串聯質譜（美國Waters公司）聯用儀(yi) ，離心機（美國Eppendorf公司），EtG和EtG-d₅（美國Cerilliant公司），N,O-雙（*基矽烷基）三氟乙酰胺-*基氯矽烷（BSTFA-TMCS,體(ti) 積比為(wei) 99：1）（美國Sigma-Aldrich公司），其餘(yu) 試劑均為(wei) 分析純。

1.2溶液配製

         EtG溶液：將100ug/ml的EtG標準甲醇溶液用甲醇稀釋得20.0ug/ml的EtG工作液。 內(nei) 標EtG-d5工作液。

1.3樣品前處理：

取血液0.10ml置於(yu) 1.5ml離心管中，加入5ul內(nei) 標EtG-d₅工作液和0.90ml乙腈，渦旋混合，以離子半徑6cm，10000r/min，離心5min，轉移上清液另一離心管中，6cm，10000r/min，離心5min，轉移上清液另一離心管中，60℃水浴中空氣流下吹幹，殘留物中加入BSTFA-TMCS（66ul）和吡啶（33ul），90℃幹燥箱中進行衍生化反應30min，取出。冷卻後1ul進樣。

1.4儀(yi) 器分析：

1.4.1氣相色譜柱條件

         色譜柱：HP-1MS毛細管柱（30mX0.25mm,0.1um）。柱溫：初溫100℃保持1min，以8℃/min程序升溫205℃，再以30℃/min程序升溫280℃保持3min。進樣口溫度： 250℃。分流比為(wei) 10：1.載氣：氦氣，流速為(wei) 1ml/min。

1.4.2質譜條件

離子源（EI源）溫度220℃，接口溫度300℃，碰撞氣為(wei) 氬氣。正離子多反應監測模式檢測，MRM定性離子對：EtG 為(wei) 261>143（CE=5）,261>73（CE=20）;EtG-d₅為(wei) 266>143（CE=5）,266>73（CE=20）;以261>143（EtG）和266>143（EtG-d₅）作為(wei) 定量離子對。

2  案例應用：

   某司機於(yu) 某日上午7：00許發生交通事故後，駕車逃離現場，當日晚21：00許投案。靜脈抽血送檢，其時距交通肇事時間為(wei) 14h，結果未檢出乙醇成分。應用本方法分析，結果檢出EtG成分，為(wei) 委托單位辦案提供了有力的證據。

3   結論

        本方法建立了一種有機溶劑沉澱蛋白，經衍生化後，用GC-MS/MS檢測血液中EtG的方法，並成功應用於(yu) 案例。該方法簡便、快速，適用於(yu) 實際檢案工作。